驚！研究生舍棄批發(fā)的符紙，憑實(shí)力跑出了人生第二條完美 WB，網(wǎng)友：不靠玄學(xué)全講科學(xué)

你一定有過(guò)這種體驗(yàn)。深夜的實(shí)驗(yàn)室，離心機(jī)嗡嗡轉(zhuǎn)著，你像個(gè)等待開(kāi)獎(jiǎng)的賭徒，緊張地湊到屏幕前，心里默念了三遍「求求了這次一定要成」，儀式感不亞于寺廟求簽。下一秒，你愣住了。

它確實(shí)「成了」—— 以一種你完全沒(méi)預(yù)料到的方式：

條帶彎成了笑臉，細(xì)胞排成了愛(ài)心，菌落長(zhǎng)成了星座圖。

下面，請(qǐng)欣賞第一屆實(shí)驗(yàn)室非正式藝術(shù)展——

*參展作品均由不知名的移液槍手、離心機(jī)操作員和培養(yǎng)箱守夜人傾情提供。

• 你看，共聚焦下的細(xì)胞，它阿巴阿巴。

圖源：小紅書(shū)

• 你看，平板上放飛自我的菌落，網(wǎng)友：眼球菌！瞳孔放大菌！

圖源：小紅書(shū)

• 下面這位跑膠跑出 6 只 QQ 企鵝的，比較起來(lái)倒顯得具象化了。

圖源：小紅書(shū)

• 而明明是分組加的蛋白，為什么 …… 擱這彈上鋼琴了？

你是在彈鋼琴嗎？ 圖源：小紅書(shū)

這些玄學(xué)名場(chǎng)面里，有一位常年霸榜的神圖量產(chǎn)之王：Western Blot。

它太經(jīng)典了。經(jīng)典到每個(gè)分子生物狗都和它有過(guò)一段「明明按 protocol 來(lái)了啊」的血淚史。別的實(shí)驗(yàn)翻車(chē)還能笑，WB 翻車(chē)直接要命 ——

條帶一丑，組會(huì)發(fā)抖。

• 有網(wǎng)友跑出了，電影院五連座 —— 誰(shuí)懂啊，C 位甚至是個(gè)按摩椅！！！

圖源：小紅書(shū)

網(wǎng)友神評(píng)：差評(píng)，扶手太小了沒(méi)法放爆米花

• 再看著這對(duì)「大眼瞪小眼」的怪誕形狀，不禁高唱：「你是我的眼 ～～～陪我領(lǐng)略 ......」

圖源：小紅書(shū)

作者銳評(píng)：許嵩，這次我真的在搞原創(chuàng) ~

• 以為會(huì)看到清晰的目的條帶，結(jié)果收獲了一對(duì)「時(shí)尚單品」。

這位網(wǎng)友你真的冒昧 圖源：小紅書(shū)

• 鴨（雞）or 蛋的起源問(wèn)題。

嗯？先有雞還是先有蛋 圖源：小紅書(shū)

緊接著網(wǎng)友跟了一個(gè)由大到小的「蛋」。

哦莫 大大大小小小~1234567... 圖源：小紅書(shū)

被神奇 WB 條帶苦苦折磨的廣大碩博不禁發(fā)問(wèn) ——

所以，我的 WB 到底還有沒(méi)有救？

別急。你離一條漂亮的 WB，可能就差一張「對(duì)癥下藥」的排查清單。

下面，學(xué)霸君將詳細(xì)拆解它們的真實(shí)成因，并給出真正能落地的解決思路。不燒符紙，不靠玄學(xué)，咱們用科學(xué)把條帶「正」回來(lái)。

NO.1 啞鈴狀條帶

你別說(shuō)，什么配重都有呢 圖源：網(wǎng)絡(luò)

原因分析：

1. 制膠液未混勻或含雜質(zhì)，凝膠凝固不均；

2. 蛋白樣本含不溶性雜質(zhì)。

改進(jìn)方法：

1. 制膠液充分溶解混勻，凝膠現(xiàn)用現(xiàn)配；

2. 蛋白上樣前離心，取上清。

NO.2條帶彌散

繃不住了，這都是些啥 圖源：網(wǎng)絡(luò)

原因分析：

1. 電泳電壓過(guò)低；

2. 轉(zhuǎn)膜夾松緊不適、電流過(guò)大或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)產(chǎn)熱致凝膠變形；

3. PVDF 膜濕潤(rùn)不均、污染或過(guò)期，濾紙重復(fù)使用，轉(zhuǎn)膜液配比錯(cuò)誤或含雜質(zhì)。

改進(jìn)方法：

1. 使用新鮮電泳液，調(diào)整電壓；

2. 轉(zhuǎn)膜液新鮮配制并預(yù)冷，全程低溫，合理設(shè)置電流；

3. 轉(zhuǎn)膜夾松緊適中，PVDF 膜完好，濾紙不重復(fù)使用。

NO.3微笑/哭臉條帶

笑一笑算了，要不還是哭吧 圖源：網(wǎng)絡(luò)

原因分析：

1. 電泳液重復(fù)使用或配比錯(cuò)誤；

2. 凝膠放置過(guò)久干燥或凝固不均；

3. 電壓過(guò)高。

改進(jìn)方法：

1. 使用新鮮電泳液（≤3 次），正確配比；

2. 凝膠現(xiàn)用現(xiàn)配，制膠前混勻；

3. 濃縮膠 60-80V，分離膠 80-120V。

NO.4膜上小黑點(diǎn)

咦 看著頭皮有點(diǎn)發(fā)麻 圖源：網(wǎng)絡(luò)

原因分析：

1. 轉(zhuǎn)膜液或封閉液未充分溶解；

2. PVDF 膜過(guò)期或損壞，二抗重復(fù)使用；

3. 脫脂奶粉封閉引起非特異性結(jié)合。

改進(jìn)方法：

1. 液體充分溶解后使用；

2. 用新鮮 PVDF 膜，二抗使用 ≤3 次；

3. 必要時(shí)改用 BSA 封閉。

NO.5條帶一邊亮一邊暗

這是所有里面最正常的 圖源：網(wǎng)絡(luò)

原因分析：

1. 發(fā)光底物或一抗、二抗不均或覆蓋不足；

2. 轉(zhuǎn)膜夾過(guò)松致轉(zhuǎn)移不均。

改進(jìn)方法：

1. 摸索最佳上樣量，發(fā)光液或一抗、二抗充分覆蓋；

2. 轉(zhuǎn)膜夾松緊適中。

NO.6個(gè)別條帶拖尾

Hello，你是長(zhǎng)頭發(fā)了嗎？ 圖源：網(wǎng)絡(luò)

原因分析：

1. 上樣量過(guò)大或一抗?jié)舛冗^(guò)高；

2. 蛋白降解或溶解不佳形成聚集體；

3. 分離膠濃度過(guò)高、緩沖液 pH 問(wèn)題或電泳產(chǎn)熱嚴(yán)重，蛋白剛開(kāi)始沒(méi)跑下去。

改進(jìn)方法：

1. 調(diào)整上樣量及抗體條件；

2. 冰上提取蛋白，加蛋白酶抑制劑，-80℃ 分裝保存，上樣前離心；

3. 選合適濃度分離膠，用新鮮電泳液，長(zhǎng)時(shí)間電泳加冰袋控溫。

好啦，看完這些是不是想立刻跑一波 WB 試試水？跑膠前牢記口訣：「樣要?jiǎng)颉⒁阂洹⒖贵w要專(zhuān)一」，該排查的排查，該優(yōu)化的優(yōu)化。

相信大家的手機(jī)相冊(cè)里，一定也有「不舍得刪」的實(shí)驗(yàn)神圖 ——是歪成貪吃蛇的 WB 條帶？是長(zhǎng)成骷髏臉的細(xì)胞？還是小鼠的神奇發(fā)型？

歡迎在評(píng)論區(qū)狠狠砸圖，讓我們一起評(píng)選本屆「實(shí)驗(yàn)室藝術(shù)大賞」的冠軍。點(diǎn)贊最高的那位，我單方面宣布：你就是你們課題組的「實(shí)驗(yàn)畢加索」，下次組會(huì) PPT 記得把這張圖放進(jìn)去，保準(zhǔn)讓導(dǎo)師眼前一亮 。

來(lái)吧，評(píng)論區(qū)交給你！

題圖來(lái)源：圖蟲(chóng)創(chuàng)意