上海
這是達醫曉護的第5792篇文章
我說我是搞病理診斷的，你一臉疑惑！
我解釋說就是顯微鏡下看片的，你哦了一聲，然后問是不是和看影像膠片一樣，黑白灰幾個色度來判斷疾病？
我說不是，病理的色彩可豐富了，打個比喻：你可以把影像色彩想象成老式黑白電視呈現的畫面效果，那病理色彩就是彩色電視機呈現的畫面效果，不信給你看幾張圖片：
怎么樣？“五顏六色”用來形容不足為過吧！顯微鏡下病理色彩可豐富了。
當然不同色彩，需要不同的染色方法。
今天就給大家介紹病理科最常見的染色方法-HE染色。
蘇木素-伊紅染色（HE染色）是組織學和病理學中最常用的染色方法，其原理基于細胞內不同成分的化學性質與染料的結合。
1. 細胞核染色原理
蘇木素的作用
蘇木素是一種堿性染料，經媒染劑處理后攜帶正電荷。細胞核內的染色質主要成分是DNA，DNA雙螺旋結構中磷酸基向外，使外側帶負電荷，呈酸性。蘇木素的正電荷與DNA的負電荷通過離子鍵或氫鍵結合，形成帶正電荷的復合物。在堿性環境下，該復合物被氧化為藍色的蘇木紅，從而使細胞核染成藍色。（下圖示皮膚、腸黏膜組織）
相關結構染色
除細胞核外，鈣鹽、軟骨、黏液等也因含酸性物質，能與蘇木素結合而呈藍色或紫藍色。（下圖示軟骨、病變鈣化組織）
2. 細胞質染色原理
伊紅的作用
伊紅是酸性染料，在水中解離為帶負電荷的陰離子。細胞質的主要成分是蛋白質，為兩性化合物。當染液pH調至蛋白質等電點（4.7-5.0）以下時，蛋白質帶正電荷，可與伊紅的負電荷陰離子結合，使細胞質染成紅色或粉紅色。（下圖示肝組織、肌肉組織）
其他成分染色
紅細胞、肌肉、結締組織、嗜伊紅顆粒等因含堿性物質，也能被伊紅染成不同程度的紅色。（下圖示小血管內紅細胞、骨骼肌組織）
3. 染色過程中的關鍵步驟
分化作用
染色后用鹽酸酒精等分化液處理，去除細胞核和細胞質中過多結合的蘇木素，使細胞核與細胞質染色更分明。
返藍作用
分化后細胞核呈紅色，需用弱堿性溶液（如氨水、碳酸鋰溶液）使蘇木素恢復為藍色，增強細胞核的染色效果。
通過蘇木素染細胞核為藍色、伊紅染細胞質為紅色，形成鮮明對比，便于觀察細胞和組織的形態結構，是HE染色的核心原理。（下圖示乳腺、橫紋肌組織）
具體染色步驟如下
1、石蠟切片脫蠟至水，冰凍切片晾干即可；
2、切片入蘇木素染色3-5min，水洗，鹽酸水溶液分化約3s，自來水洗，氨水返藍約3s，自來水洗；
3、鏡檢細胞核呈淡藍色至藍色（由不同組織決定），背景淡藍色或者近乎無色；
4、切片依次入85%和95%乙醇脫水各4分鐘，入伊紅染液4-5min，三缸無水乙醇脫水，每缸4-5min，正丁醇透明4-5min，兩缸二甲苯透明，每缸2-4min；
5、切片轉入盛有干凈二甲苯的方缸中，中性樹膠封片。
結果判讀
細胞核呈藍色，軟骨基質、鈣鹽顆粒深藍色，粘液灰藍色，細胞漿呈深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內嗜酸性顆粒呈鮮紅色，膠原纖維呈淡粉紅色，彈力纖維亮粉紅色，紅細胞橘紅色，蛋白性粘液粉紅色。（下圖分別示皮膚、胎盤、腸黏膜、血管組織）
當然，時代在進步，病理診斷閱片都用人工智能了，更別說染色了。現在各醫院病理科幾乎都沒有手工染色了吧，取而代之的是全自動染色機，包括染色各個步驟及封片流程，對于大批量的切片染色來說，效率非常高，并且機染顏色質量比手工染更穩定。（圖為我科全自動HE染色機）
作者：川北醫學院附屬醫院
病理科 潘盛蘭
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