外泌體研究火了這么多年,方法也是五花八門:超速離心、尺寸排阻、沉淀法、磁珠法、柱純法…… 打開文獻,各家都言之鑿鑿,看得人心潮澎湃,仿佛哪種都能「打通任督二脈」。
但冷靜下來想一想:文獻里最好、最純的方法,就一定適合你嗎?答案往往是否定的。
血漿樣本少時,磁珠法比超離、尺寸排阻更劃算;
細胞上清如果追求「多快好省」,沉淀法比超離更合適,有條件的話,專用無血清培養基還能從源頭減少干擾;
體液樣本本就稀少,得率太低的方法可能根本推進不下去;
動物組織和植物樣本,超離更是無法直接下手,必須先經過針對性的預處理。
Umibio 針對不同樣本類型,準備了一系列外泌體提取純化試劑盒試用裝,名額不限制,覆蓋細胞上清、血清/血漿、尿液、乳液、組織乃至細菌膜囊泡!不管你手上是哪種樣本,先領一份試用裝,用自己的樣本親自驗一驗,比看多少篇文獻都靠譜。
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那么,不同方法之間有什么區別呢?如何計算綜合成本呢?
不同提取方法的得率與適用場景
綜合成本并非單指試劑盒價格,而是耗材成本、人工成本與培養/樣本成本之和。方法得率越低,意味著需投入更多樣本、進行更多次實驗才能獲得等量外泌體,這部分隱性成本往往高于試劑本身。以下得率數據基于實驗室長期積累的實驗數據及大量客戶反饋總結而成:
PEG 沉淀法:得率約 40%,適合樣本量少、原始樣本干凈、想控制成本的場景;
預處理 + PEG 沉淀 + EPF 柱:得率約 30%,綜合性能均衡,性價比高,適合大多數實驗室的常規需求;
尺寸排阻(SEC):得率約 60%,蛋白去除率高達 94%,更適合常規拍電鏡;但要求起始樣本濃度在 3 μg/μL 以上,濃度不夠外泌體容易「消失」在柱子里;
超濾(UF):得率 40%~60%,濃縮會通過膜吸附損失大量外泌體,純度相對較低;
柱純法:得率 30%~40%,通常需要后續再濃縮一步,適合沒有超速離心機的實驗室;
磁珠法:得率 30%~40%,基于電荷原理捕獲外泌體。
植物細胞外囊泡(PENs),前處理才是第一道關卡
比起細胞上清、體液這類「液體樣本」,植物和大型真菌的囊泡提取難度要更高一截。超速離心根本無法直接上手,必須先完成前處理,把植物組織變成能進試劑盒的汁液。
針對這個問題,我們把常見功效性植物按照果實、花/葉、根莖、干品植物(花/根莖/種子)四大類,再加上大型真菌,分成五類,整理出了詳細的前處理方案:
出汁率(每千克原料出汁量)= 汁液體積(mL)÷ 原材料質量(kg)
① 果實類(如檸檬):出汁率 300~400 mL / kg,推薦手搖式碾磨榨汁機。以 70 g 去皮果實為例,榨汁去雜后得到 20~30 mL 汁液,前處理濃縮 50 倍,最終獲得約 400 μL 植物囊泡。薄皮果實洗凈切塊直接榨汁;厚皮果實(如檸檬)需去皮切小塊再榨汁。
② 花/葉類(如玫瑰、蘆薈):出汁率 200~300 mL/kg,推薦電動碾磨榨汁機。100 g 花/葉榨汁后得到 20~30 mL 汁液,同樣濃縮 50 倍得到約 400 μL 囊泡。花需去除花托、花萼、花蕊,只留花瓣;葉片需去除蔫掉部分和莖,只留待提取的葉。
③ 根莖類(如葛根、三七、麥冬):出汁率 150~200 mL / kg,推薦電動碾磨榨汁機。150 g 根莖處理后得到 20~30 mL 汁液,濃縮 50 倍得約 400 μL 囊泡。硬皮根莖(如葛根)需削皮切小塊,少量多次榨汁;薄皮根莖(如麥冬)洗凈去泥后直接切塊榨汁。汁液黏稠(如山藥、石斛)時可用適量 PBS 輔助溶解。
④ 干品植物類(如金銀花、紅景天、火麻仁):優先選擇可直接泡發、無需二次處理的干品,推薦旋轉刀片榨汁機。10 g 干品用 PBS 泡發后,加 20~30 mL 泡發水榨汁,濃縮 50 倍得約 400 μL 囊泡。大塊干品需先撕 / 剪成小塊再泡發。
⑤ 大型真菌類(如靈芝):推薦電動碾磨榨汁機。20 g 真菌洗凈切小片,榨汁打碎取渣后加 40~50 mL PBS,前處理濃縮 100 倍,得約 400 μL 囊泡。真菌幾乎不產生汁液,需通過磨碎 + 加 PBS 的方式來完成后續處理。
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Umibio 成立于 2015 年,專注外泌體領域十余年,客戶文獻已累計 800 余篇,產品體系覆蓋提取、純化、培養、檢測全流程。我們的成長,很大程度上就是靠客戶「試出來」的信任積累起來的 —— 即將開始植物囊泡研究的你,不用自己摸黑試錯,掃碼申請試用裝,還能獲得更深入的技術講解和一對一溝通。
內容策劃:沈佳鈺
內容審核:吳軍
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