Phytomedicine (IF=11.3，TOP)｜夏枯草膏改善高脂血癥：重塑腸道菌群與SCFAs，靶向SCAP/SREBP-2恢復肝臟膽固醇穩態！(石召華/劉松林)

2026年2月25日，湖北中醫藥大學、湖北時珍實驗室等單位石召華、劉松林教授團隊，在Phytomedicine （中科院1區，IF=11.3）在線發表題為“Xia Ku Cao Paste restores intestinal microbiota homeostasis and improves hepatic metabolism disturbances to alleviate hyperlipidemia”的研究論文。該文于2025年12月14日投稿，2026年1月27日修回，2026年2月22日接收。

高脂血癥（hyperlipidemia，HLP）是心血管疾病的重要危險因素。該研究聚焦傳統中藥制劑夏枯草膏（Xia Ku Cao Paste，XKCP），通過UPLC-Q-TOF-MS/MS、網絡藥理學、高脂飲食誘導高脂血癥大鼠模型、油酸鈉誘導HepG2細胞脂質蓄積模型、肝臟蛋白組學、腸道菌群宏基因組學、游離脂肪酸（FFA）和短鏈脂肪酸（SCFAs）檢測、SCAP/SREBP-2通路抑制劑干預及分子對接等方法，系統闡明其降脂作用和潛在機制。

研究發現，XKCP可改善高脂飲食誘導的大鼠血脂異常、肝臟脂肪變、炎癥和氧化應激；同時重塑腸道菌群結構，調節Firmicutes、Bacteroidetes以及Clostridium、Bacteroides、Akkermansia muciniphila等菌群變化，并提高己酸、異丁酸、異戊酸、戊酸和2-甲基丁酸等有益短鏈脂肪酸水平。機制上，XKCP通過調節SCAP/SREBP-2膽固醇代謝通路，恢復膽固醇穩態；其中迷迭香酸（rosmarinic acid，RA）和金圣草黃素（chrysoeriol，Chry）被鑒定為潛在關鍵活性成分。需要注意的是，該研究證據主要來自動物和細胞模型，不能直接等同于人體臨床療效。

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【摘 要】

背景：高脂血癥（hyperlipidemia，HLP）是心血管疾病最關鍵的致病因素之一。夏枯草膏（Xia Ku Cao Paste，XKCP）是一種主要由夏枯草（Prunella vulgaris L.）制成的傳統中藥制劑。目前，關于其治療HLP的療效及機制研究仍然有限。

目的：本研究旨在通過體內和體外模型，探討XKCP抗HLP的療效、物質基礎及潛在機制。

方法：研究采用超高效液相色譜-四極桿飛行時間質譜（UPLC-Q-TOF-MS/MS）表征XKCP的化學成分及入血成分。體內模型采用高脂飲食（high-fat diet，HFD）誘導的HLP大鼠，體外模型采用油酸鈉（sodium oleate，SO）誘導的HepG2細胞。研究結合血清生化檢測、組織病理學分析、肝臟蛋白組學、腸道菌群分析、短鏈脂肪酸（short-chain fatty acids，SCFAs）檢測、游離脂肪酸（free fatty acids，FFA）定量、SCAP/SREBP-2通路特異性抑制劑干預以及分子對接等方法，評價XKCP的治療作用，并闡明其抗HLP的潛在活性成分和作用通路。

結果：UPLC-Q-TOF-MS/MS化學分析共鑒定出XKCP中的75種成分，其中21種為吸收入血的原型成分，18種為代謝物。在HLP大鼠中，XKCP顯著調節血清脂質水平，改善肝臟脂肪變和肝損傷，并減輕炎癥和氧化應激反應。XKCP還可改善HLP大鼠的腸道菌群失衡，顯著影響Firmicutes、Bacteroidetes以及Clostridium、Bacteroidetes和Akkermansia muciniphila等菌群。此外，XKCP明顯降低血清硬脂酸和油酸濃度，并調節關鍵脂肪酸生物合成及代謝通路。XKCP還可增加腸道中有益SCFAs水平，如己酸、異丁酸、異戊酸、戊酸和2-甲基丁酸。相關性分析顯示，XKCP誘導的腸道菌群變化與代謝物譜變化之間存在顯著相關性。機制上，XKCP靶向SCAP/SREBP-2通路，調節膽固醇水平并維持膽固醇穩態，從而糾正代謝紊亂。與體內結果一致，XKCP及其潛在活性成分迷迭香酸和金圣草黃素，可顯著減輕油酸鈉誘導的HepG2細胞脂質蓄積。

結論：XKCP可有效緩解HFD誘導的高脂血癥。其機制涉及改善腸道菌群平衡、調節FFA和SCFAs水平，以及調控SCAP/SREBP-2通路，從而共同糾正代謝紊亂。迷迭香酸和金圣草黃素被鑒定為XKCP發揮抗高脂血癥作用的潛在活性成分。總體而言，本研究為XKCP未來在HLP治療中的潛在臨床應用提供了實驗依據和理論支持。

01

研究背景及科學問題

高脂血癥（HLP）是心血管疾病的主要危險因素。隨著生活方式改變和人口老齡化，其患病率快速上升，已經成為亟需關注的重要公共衛生問題。HLP通常表現為脂蛋白譜異常，包括總膽固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）和甘油三酯（triglycerides，TG）升高，同時高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）降低。

HLP的發病機制復雜多樣，核心在于脂質代謝失衡。炎癥反應、氧化應激和腸道菌群失衡等因素，可進一步加重脂質代謝紊亂。在人體復雜的內環境中，膽固醇作為重要脂質分子，必須保持動態平衡，才能支持細胞正常功能和整體代謝穩定。SREBP切割激活蛋白（SREBP cleavage-activating protein，SCAP）/固醇調節元件結合蛋白2（sterol regulatory element-binding protein-2，SREBP-2）調控軸，對于維持膽固醇穩態非常重要。該通路主要通過調節下游關鍵酶，如角鯊烯環氧化酶（squalene epoxidase，SQLE）和甲羥戊酸二磷酸脫羧酶（mevalonate diphosphate decarboxylase，MVD），參與內源性膽固醇合成和攝取調控，從而維持膽固醇穩態。當膽固醇攝入和蓄積過多，尤其是在肝臟內過度蓄積時，這種動態平衡會被打破，并激活多種負反饋機制以試圖恢復穩態。

此外，腸道菌群和腸屏障完整性也參與HLP、肥胖等代謝紊亂過程。腸道菌群的組成和動態變化可直接調節宿主穩態，其代謝能力及代謝產物能夠影響宿主免疫和代謝功能。臨床上，他汀類和貝特類藥物具有較強降脂作用，但長期單藥或聯合用藥可能引起肌病、肝毒性和腎毒性等不良反應。因此，在血脂異常負擔持續增加的背景下，探索來源于天然產物的安全有效替代或輔助治療策略，具有重要意義。

夏枯草（Prunella vulgaris L.）為唇形科植物的干燥果穗，具有多種藥理作用，包括抗炎、抗氧化和抗病毒等。隨著其藥用價值不斷被發掘，來源于夏枯草的中藥制劑，如口服液、丸劑和膏劑，逐漸得到應用。膏劑是傳統中醫藥的重要劑型之一，通過中藥煎煮和濃縮制備，可根據個體體質和臨床癥狀靈活配伍適當輔料，兼具治療和調養作用。由于其成分較易被機體吸收、作用溫和且持久，在中醫臨床調養和慢性病防治中具有獨特應用價值。

XKCP是以夏枯草經水提和濃縮制成的口服膏劑，富含酚酸類、萜類和黃酮類等生物活性成分。已有研究顯示，迷迭香酸可通過特定機制緩解非酒精性脂肪性肝炎和肝纖維化；槲皮素可劑量依賴性降低高脂飲食小鼠血清TG和TC濃度，并緩解肝臟脂肪變；夏枯草多酚可通過抑制STAT3并激活PI3K-Akt通路發揮抗動脈粥樣硬化作用，從而調節脂質代謝；夏枯草多糖則可能通過抗脂質過氧化、減輕炎癥以及調節糖、氨基酸、能量和脂質代謝干預高脂血癥。現代藥理學研究已初步證明夏枯草具有降脂作用，為其制劑在血脂調控領域的應用提供了理論支持。然而，XKCP抗HLP的療效、明確物質基礎及系統機制，仍需進一步闡明。

本研究系統考察XKCP治療HLP的療效、物質基礎和作用機制。首先，研究采用UPLC-Q-TOF-MS/MS表征XKCP化學成分及入血成分。隨后，通過HFD誘導HLP大鼠體內模型和油酸鈉誘導HepG2細胞體外模型，評價其抗HLP作用。進一步，研究利用宏基因組學和代謝組學分析XKCP對HLP大鼠腸道菌群和宿主代謝的影響。最后，研究整合網絡藥理學、肝臟蛋白組學、SCAP/SREBP-2通路特異性抑制劑干預和分子對接，探索XKCP發揮治療作用的關鍵活性成分和分子機制。這些發現為XKCP未來用于HLP管理提供了實驗基礎。

02

重要發現及亮點

XKCP入血成分鑒定及網絡藥理學分析提示其可能通過多通路發揮降脂作用

研究首先在正、負離子模式下采用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析XKCP及血清樣本。結果顯示，XKCP中共鑒定出75種成分，包括三萜類、黃酮類、酚酸類和脂肪酸類。通過比較XKCP、含藥血清和空白血清的總離子流色譜圖，研究鑒定出21種入血原型成分，包括迷迭香酸和咖啡酸。此外，在含藥血清中還鑒定出18種與有機酚酸相關的代謝物，包括5種咖啡酸代謝物、4種阿魏酸代謝物、3種綠原酸代謝物、3種香草酸代謝物和2種原兒茶酸代謝物。研究還以咖啡酸和阿魏酸代謝物為例，展示了其在大鼠體內的主要代謝通路。

隨后，研究利用網絡藥理學技術識別XKCP潛在治療靶點，并通過靶點相關通路分析預測可能作用機制。蛋白互作網絡分析、GO和KEGG富集分析顯示，XKCP治療HLP可能與TNF、IL-6、ALB、PPARG和PPARA等潛在靶點相關，并可能通過調節PPAR、PI3K-Akt、AMPK和類固醇激素生物合成等多條通路發揮作用。

圖1：XKCP入血成分分析。XKCP（a）、空白血清（b）和含藥血清（c）在正、負離子模式下的總離子流色譜圖。

XKCP改善HFD誘導HLP大鼠的整體病理狀態和血脂異常

研究的動物實驗流程如圖2a所示。實驗期間，研究監測了所有大鼠的體重變化。實驗開始時，各組初始體重無顯著差異。建模階段出現明顯差異：對照組維持正常攝食，體重隨時間緩慢增加；模型組早期攝食增加、體重明顯上升，但隨著HLP加重，攝食量下降，體重逐漸降低。作者認為，這可能與高脂飲食引起飽腹感、延遲胃排空，從而減少高脂飼料攝入有關。XKCP給藥后，各給藥組攝食量逐漸恢復，體重緩慢增加，提示XKCP可能改善HLP相關不良狀態。同時，在設定劑量下，XKCP給藥大鼠未出現異常體重下降、行為改變或死亡等明顯不良反應，支持其安全性。

實驗結果顯示，XKCP顯著改善HFD誘導的HLP及相關代謝紊亂。與對照組相比，HFD喂養大鼠肝臟指數和附睪脂肪指數顯著升高（P<0.0001），XKCP給藥可緩解這些變化（P<0.01）。心臟和腎臟指數在各組間相近。血清脂質檢測顯示，HFD大鼠TG、TC和LDL-C顯著升高，HDL-C降低（P<0.0001），說明HLP模型成功建立。XKCP和洛伐他汀片（lovastatin tablets，LVT）處理均顯著改善這些血脂指標（P<0.05）。此外，模型組動脈粥樣硬化指數（atherosclerosis index，AI）、冠心病指數（coronary heart disease index，CRI）、極低密度脂蛋白膽固醇（very low-density lipoprotein cholesterol，VLDL-C）以及LDL-C/HDL-C比值也明顯升高（P<0.0001），而XKCP可顯著降低上述指標（P<0.05）。這些結果說明，XKCP可有效緩解HLP，并明顯減少脂質蓄積。

圖2：XKCP改善HLP大鼠的病理狀態。（a）實驗設計示意圖。（b）體重。（c）中期血脂指標。（d）肝臟指數。（e）附睪脂肪指數。（f–i）血清TC、TG、HDL-C和LDL-C水平。（j–m）血清AI、CRI、LDL-C/HDL-C比值和VLDL-C水平。數據以均值±標準差（SD）表示（n=8）。與Control組比較，##<0.001，###<0.0001。與Model組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001。

XKCP減輕HLP大鼠肝臟脂肪變、肝損傷、炎癥和氧化應激

各組大鼠肝臟形態和組織學特征如圖3所示。Control組大鼠肝臟呈均勻紅褐色，表面光滑有光澤，邊緣銳利，質地柔軟有彈性，無油膩感。Model組肝臟呈黃白色、體積增大，邊緣鈍圓，質地較韌，表面略油膩。XKCP給藥后，肝臟體積和形態明顯恢復。

H&E染色顯示，Control組肝細胞形態規則、邊界清晰，胞質內無脂滴，也無炎癥浸潤或變形。Model組肝細胞腫脹、排列紊亂、大小不一，胞質內可見大量不同大小的脂肪空泡，并伴有炎癥浸潤。XKCP給藥后，肝細胞形態改善，脂肪變明顯減輕，脂滴蓄積減少，炎癥浸潤緩解。油紅O染色顯示，Control組肝細胞幾乎無脂質沉積，而Model組出現明顯彌漫性胞質脂肪變；XKCP處理可顯著減輕肝細胞脂質蓄積。心臟、結腸、腎臟和附睪脂肪組織病理切片顯示，XKCP還可減輕HFD誘導的心肌纖維排列紊亂、細胞結構異常、附睪脂肪細胞肥大，以及腸道和腎臟損傷。上述結果進一步證實，XKCP可有效減輕脂質蓄積及其相關損傷。

生化分析顯示，HFD可導致肝損傷，使AST和ALT水平升高（P<0.0001）。XKCP給藥顯著降低血清和肝臟AST、ALT水平（P<0.01）。氧化應激和炎癥反應通常與HLP密切相關。本研究中，XKCP顯著減少脂質過氧化產物丙二醛（malondialdehyde，MDA）蓄積（P<0.05），并緩解抗氧化酶超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）和過氧化氫酶（catalase，CAT）異常下降（P<0.05）。此外，XKCP還顯著降低血清和肝臟中炎癥因子IL-1β、TNF和IL-6水平（P<0.05）?？傮w而言，XKCP可改善HFD誘導HLP大鼠的多種病理生理改變，包括血脂異常、肝臟脂肪變、肝細胞損傷以及炎癥和氧化應激反應。

圖3：XKCP對肝臟脂肪變、損傷、炎癥和氧化應激的影響。（a）肝組織照片；（b）肝細胞H&E染色切片（放大倍數40×，比例尺：20 μm）。黑色箭頭表示充滿脂滴的肝細胞，紅色箭頭表示肝細胞內大量空泡樣變性。（c）肝細胞油紅O（Oil Red O，ORO）染色切片（放大倍數20×，比例尺：50 μm）。（d–g）血清和肝臟AST及ALT水平。（h–k）血清SOD、MDA、GSH-Px和CAT水平。（l–q）血清和肝臟IL-6、TNF和IL-1β水平。數據以均值±SD表示（n=8）。與Control組比較，##<0.001，###<0.0001。與Model組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001。

XKCP改善HLP大鼠腸道菌群失衡

鑒于XKCP在體內對HLP具有明顯治療作用，研究進一步推測其作用機制可能涉及腸道菌群調節。因此，研究對Control組、Model組和XKCP-H組糞便樣本進行了宏基因組測序分析。主成分分析（principal component analysis，PCA）和主坐標分析（principal coordinate analysis，PCoA）顯示，Control組與Model組腸道菌群明顯分離，說明HFD導致腸道菌群發生顯著變化。XKCP處理后，菌群結構向Control組靠近，提示XKCP可部分改善HLP大鼠腸道菌群多樣性。

進一步聚類分析顯示，不同組在門、屬、種水平上的群落組成存在差異。門水平上，HFD增加Bacteroidetes豐度并降低Firmicutes豐度。屬水平上，HFD增加Bacteroides和Parabacteroides，同時降低Clostridium和Oscillibacter。XKCP補充可改善這些腸道菌群變化。此外，研究提示Bacteroides uniformis和Akkermansia muciniphila可能參與HFD誘導的HLP。LEfSe分析顯示，Control組以Lactobacillus和Firmicutes bacterium CAG 475為特征；Model組以Bacteroides和Akkermansia muciniphila為特征；XKCP-H組則以Helicobacter和Firmicutes bacterium為特征。最后，KEGG代謝通路富集分析顯示，XKCP干預顯著調節碳水化合物代謝、氨基酸代謝、脂質代謝和能量代謝通路。該結果提示，XKCP可明顯改善HFD誘導的能量代謝和免疫調控失衡?？傮w而言，XKCP可顯著改善HLP大鼠腸道菌群失衡。

圖4：XKCP對腸道菌群的影響。（a–b）各組腸道菌群PCA和PCoA得分圖。（c–e）門、屬和種水平腸道菌群豐度熱圖。（f–h）門、屬和種水平腸道菌群群落組成柱狀圖。（i–j）LEfSe分析得到的系統發育樹，顯示屬和種等多個分類水平。（k）差異表達unigenes的KEGG富集分析。數據以均值±SD表示（n=3，P<0.05表示差異具有統計學意義）。

XKCP調節血清FFA水平并促進腸道SCFAs產生

FFA代謝失衡與高脂血癥發生發展密切相關。生理條件下，FFA是能量代謝的重要底物；但在代謝紊亂狀態下，FFA過度釋放會導致血脂異常，進而誘發或加重HLP。為探討XKCP治療高脂血癥的潛力，研究采用氣相色譜-質譜（GC-MS）分析Control組、Model組和XKCP-H組大鼠血清代謝物譜。PCA顯示三組明顯分離，提示其處于不同代謝狀態。XKCP處理顯著糾正HFD誘導的硬脂酸和油酸水平升高（P<0.05）。不過，XKCP對模型組下降的花生四烯酸水平影響未達到統計學顯著性。KEGG分析進一步顯示，XKCP主要影響不飽和脂肪酸生物合成、脂肪酸生物合成和脂肪酸代謝等關鍵通路。上述發現提示，XKCP可通過靶向這些代謝通路調節FFA水平，從而促進脂肪酸分解、抑制HFD誘導的脂質合成，最終減少肝臟脂質蓄積和炎癥。

此外，腸道菌群失衡通常伴隨SCFAs水平下降。研究定量檢測了8種常見SCFAs，以評價XKCP對HLP大鼠腸道SCFAs譜的影響。結果顯示，Model組僅己酸顯著下降（P<0.01，與Control組相比），而XKCP-H處理顯著提高己酸、異丁酸、異戊酸、戊酸和2-甲基丁酸水平（P<0.05或P<0.01，與Model組相比）。

圖5：XKCP對HLP大鼠血清FFA的影響。（a）實驗流程。（b）PCA得分圖。（c）差異代謝物熱圖。（d）差異代謝物KEGG通路分析。（e–g）Control組、Model組和XKCP組中硬脂酸、油酸和花生四烯酸濃度。數據以均值±SD表示（n=4）。與Control組比較，##<0.001。與Model組比較，*P<0.05，**P<0.01，ns表示無顯著差異。

XKCP調節的代謝物與特定腸道菌屬存在相關性

為考察XKCP改善HLP大鼠腸道菌群失衡是否也會影響代謝物，研究進一步分析了3類FFA、5種SCFAs與圖4中20個腸道菌屬相對豐度之間的相關性。整體相關性結果顯示，|R|越接近1且P<0.05時，相關性越顯著。

結果顯示，油酸與Bacteroidales-Phocaeicola呈正相關，與Clostridia-Anaerostipes呈負相關。2-甲基丁酸與Clostridiales-Clostridium呈正相關，與Clostridia-Roseburia呈負相關。硬脂酸與Bacteroidales-Parabacteroides和Akkermansia呈正相關，與Clostridium-Pseudoflavonifractor、Alistipes和Flavonifractor呈負相關?；ㄉ南┧崤cLactobacillales-Ligilactobacillus呈正相關，己酸與Clostridiales-Anaerotruncus呈正相關。相關性分析表明，XKCP干預與高脂血癥大鼠腸道菌群和代謝物變化之間存在顯著聯系。

圖6：XKCP對腸道SCFAs的影響，以及代表性代謝物與腸道菌屬之間的相關性分析。（a）實驗流程。各組中（b）2-甲基丁酸、（c）己酸、（d）異丁酸、（e）異戊酸和（f）戊酸濃度。數據以均值±SD表示（n=4）。與Control組比較，#<0.01。與Model組比較，*P<0.05，**P<0.01，ns表示無顯著差異。（g）整體相關性分析熱圖。（h）油酸與o-Bacteroidales、f-Norank、g-Phocaeicola的相關性。（i）硬脂酸與o-Bacteroidales、f-Tannerellaceae、g-Parabacteroides的相關性。（j）2-甲基丁酸與o-Clostridiales、f-Lachnospiraceae、g-Roseburia的相關性。（k）硬脂酸與o-Bacteroidales、f-Rikenellaceae、g-Alistipes的相關性。（l）硬脂酸與o-Clostridiales、f-Ruminococcaceae、g-Pseudoflavonifractor的相關性。（m）2-甲基丁酸與o-Clostridiales、f-Clostridiaceae、g-Clostridium的相關性。（n）硬脂酸與o-Clostridiales、f-Ruminococcaceae、g-Flavonifractor的相關性。（o）硬脂酸與o-Verrucomicrobiales、f-Akkermansiaceae、g-Akkermansia的相關性。（p）花生四烯酸與o-Lactobacillales、f-Lactobacillaceae、g-Ligilactobacillus的相關性。（q）己酸與o-Clostridiales、f-Ruminococcaceae、g-Anaerotruncus的相關性。（r）油酸與o-Clostridiales、f-Ruminococcaceae、g-Anaerotruncus的相關性。圖中點從左到右分別代表Control組、Model組和XKCP組。

肝臟蛋白組學提示XKCP影響脂質代謝相關通路

研究進一步采用肝臟蛋白組學分析XKCP對HLP大鼠肝臟蛋白表達譜的影響。PCA顯示三組明顯分離，且XKCP-H組向Control組移動。以|Log2 fold change|>1.5且P<0.05為篩選標準，研究篩選出XKCP調控的差異表達蛋白?；鹕綀D顯示，Model組與Control組之間共有910個差異表達蛋白，其中466個上調、444個下調；XKCP-H組與Model組之間共有100個差異表達蛋白，其中43個上調、57個下調。Venn圖進一步顯示，三組間共有55個核心差異表達蛋白發生變化，包括SQLE、MVD和細胞色素P450 2E1（Cyp2e1）等。

GO和KEGG分析顯示，XKCP主要影響花生四烯酸代謝、PPAR信號通路和類固醇激素生物合成等通路，為解釋XKCP治療HLP的機制提供了參考。

圖7：XKCP對HLP大鼠肝臟蛋白組學的調控作用。（a）PCA得分圖。（b）Control組與Model組之間差異表達蛋白火山圖。（c）Model組與XKCP-H組之間差異表達蛋白火山圖。（d）Venn圖。（e）Control組與Model組之間差異表達蛋白聚類熱圖。（f）Model組與XKCP-H組之間差異表達蛋白聚類熱圖。（g）Control組與Model組之間KEGG富集結果。（h）Model組與XKCP-H組之間KEGG富集結果。

XKCP抑制油酸鈉誘導的HepG2肝細胞脂肪變、炎癥和氧化應激

為了評價XKCP對脂質蓄積的治療作用，研究建立了油酸鈉誘導的HepG2細胞脂質蓄積模型。根據細胞毒性實驗結果，研究設置不同濃度XKCP用于后續治療評價。與Model組相比，XKCP處理可有效減輕油酸鈉誘導的脂質蓄積，表現為油紅O染色脂滴更加稀疏（P<0.01）。XKCP還可調節細胞脂質指標，降低TG、TC和HDL-C，并升高LDL-C（P<0.01）。

此外，為判斷XKCP是否可改善脂質蓄積相關損傷，研究檢測了反映肝細胞損傷、炎癥反應和氧化應激的關鍵生物標志物。結果顯示，XKCP顯著降低AST和ALT水平（P<0.01，與Model組相比），減少脂質過氧化產物MDA蓄積，并緩解抗氧化酶SOD、GSH-Px和CAT異常下降（P<0.01，與Model組相比）。XKCP還明顯抑制IL-1β、TNF-α和IL-6生成（P<0.05，與Model組相比）?？傮w而言，XKCP在體外可有效緩解油酸鈉誘導的肝細胞脂質蓄積，并保護肝細胞免受炎癥和氧化應激損傷。

圖8：XKCP在油酸鈉誘導HepG2細胞中的作用。（a–c）不同藥物對HepG2細胞的細胞毒性測試結果。（d）聯合用藥處理對HepG2細胞的細胞毒性測試結果。（e）HepG2細胞油紅O染色。（f）經異丙醇洗脫油紅O后的OD水平。（g–j）細胞TC、TG、HDL-C和LDL-C水平。（k–n）SOD、MDA、GSH和CAT水平。（o–p）AST和ALT水平。（q–s）IL-6、TNF-α和IL-1β水平。數據以均值±SD表示（n=3）。與Control組比較，##<0.001，###<0.0001。與Model組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001。

XKCP通過SCAP/SREBP-2通路調節肝臟脂質代謝紊亂

為闡明XKCP調控脂質代謝的潛在機制，研究整合網絡藥理學和蛋白組學數據進行KEGG通路分析。結果主要集中在類固醇激素生物合成和藥物代謝-其他酶兩大通路，提示XKCP可能通過調節這些通路中的關鍵步驟影響脂質代謝。由于類固醇激素生物合成需要膽固醇作為前體，而膽固醇對多種生理功能至關重要且必須維持在嚴格穩態范圍內，因此研究推測，XKCP的降脂作用可能與膽固醇代謝調節有關。蛋白組學結果顯示，XKCP干預后SQLE和MVD等膽固醇合成關鍵蛋白表達發生顯著變化，進一步支持該推測。

鑒于SCAP/SREBP-2軸在維持膽固醇穩態中具有重要作用，研究進一步通過RT-qPCR和Western blot觀察該軸介導的脂質代謝相關基因及蛋白變化。在HFD誘導的HLP大鼠中，SCAP、SREBP-2、SQLE和MVD表達下降，而胰島素誘導基因2（insulin-induced gene 2，INSIG2）表達升高（P<0.05或P<0.01，與Control組相比）。這表明HFD喂養成功觸發大鼠體內膽固醇負反饋調節。在內質網中，膽固醇可與SCAP結合并改變其構象，同時INSIG2與SCAP結合并將其“鎖定”，共同阻止SREBP-2激活，進而抑制SQLE和MVD等下游基因的轉錄和表達，減少膽固醇合成。

XKCP處理后，上述基因和蛋白表達水平發生顯著改變（P<0.05或P<0.01，與Model組相比），提示其可修復HFD破壞的膽固醇穩態。在油酸鈉誘導HepG2細胞脂質蓄積模型中，RT-qPCR和Western blot結果與動物實驗一致，再次確認XKCP可通過SCAP/SREBP-2通路調節膽固醇水平，修復調控路徑并維持膽固醇動態平衡。

隨后，研究使用SCAP/SREBP-2通路特異性抑制劑25-羥基膽固醇（25-hydroxycholesterol，25-HC）進一步考察XKCP在HepG2細胞脂質代謝中的調控作用。25-HC處理后，qPCR和Western blot結果顯示，XKCP對HepG2細胞SREBP2 mRNA和蛋白表達的上調作用被抑制（與Model組相比無顯著差異），提示抑制劑處理阻斷了SREBP-2成熟和切割。進一步，XKCP對SQLE和MVD mRNA及蛋白表達的上調作用也在抑制劑干預后被抑制（與Model組相比無顯著差異）。這些結果表明，XKCP可能通過激活SCAP/SREBP-2通路，調節膽固醇水平并維持膽固醇穩態。

圖9：XKCP通過SCAP/SREBP-2通路調節肝臟脂質代謝紊亂。（a）網絡藥理學和蛋白組學KEGG通路Venn圖。（b–e）高脂血癥大鼠肝組織中SCAP、SREBP2、SQLE、MVD和INSIG2的mRNA及蛋白表達水平。（f–i）油酸鈉誘導HepG2細胞中上述基因的mRNA及蛋白表達水平。（j）XKCP降脂作用機制示意圖，紅色箭頭表示受HFD影響的上調或下調，綠色箭頭表示受XKCP影響的上調或下調。數據以均值±SD表示（n=3）。與Control組比較，<0.05，#<0.01，##<0.001。與Model組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

圖10：阻斷SCAP/SREBP-2通路會降低XKCP對HepG2細胞脂質代謝的調節作用。（a–d）HepG2細胞中SREBP2、SQLE和MVD的蛋白表達水平。（e–g）HepG2細胞中SREBP2、SQLE和MVD的mRNA表達水平。數據以均值±SD表示（n=3）。與Control組比較，<0.05，#<0.01，##<0.001。與Model組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

迷迭香酸和金圣草黃素可能是XKCP治療HLP的關鍵活性成分

為進一步闡明XKCP治療HLP的機制，研究對XKCP入血成分與上述5個核心靶點之間的相互作用進行分子對接分析。AutoDock對接結果顯示，入血成分與靶蛋白之間的結合能范圍為?6.7至?10.0 kcal/mol。較強結合親和力提示這些成分可能是XKCP抗HLP分子機制中的重要組成部分。

其中，迷迭香酸（rosmarinic acid，RA）和金圣草黃素（chrysoeriol，Chry）對各靶點均表現出較強結合能力，結合能<?6.0 kcal/mol，SD≤0.8 kcal/mol，Ki<1 μM，SD≤0.2 μM，提示二者可能是XKCP治療HLP的關鍵活性成分。隨后，研究使用HepG2細胞開展體外驗證。油紅O染色及TG、TC、HDL-C和LDL-C檢測證實，RA和Chry可有效降低脂質蓄積（P<0.01，與Model組相比）。為探索其降脂機制，研究采用RT-qPCR和Western blot檢測SCAP/SREBP-2調控的膽固醇代謝關鍵靶點SQLE和MVD表達。RA和Chry均可顯著逆轉這些異常表達模式（P<0.01，與Model組相比），說明二者可通過調節SCAP/SREBP-2軸干預油酸鈉誘導的膽固醇代謝紊亂。

圖11：迷迭香酸（RA）和金圣草黃素（Chry）是XKCP治療HLP的關鍵成分。（a）XKCP活性成分與關鍵靶點對接評分熱圖。（b–d）油酸鈉誘導HepG2細胞中SQLE和MVD的mRNA及蛋白表達水平。（e–f）關鍵靶點與代表性成分之間對接相互作用的可視化圖。（g）HepG2細胞油紅O染色。（h）經異丙醇洗脫油紅O后的OD水平。（i–j）細胞TC、TG、HDL-C和LDL-C水平。數據以均值±SD表示（n=3）。與Control組比較，<0.05，#<0.01，##<0.001。與Model組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

機制示意圖總結

綜合體內外實驗、多組學分析和分子對接結果，本研究提出：XKCP可通過兩條相互關聯的路徑緩解HLP。一方面，XKCP調節腸道菌群結構，改善高脂飲食誘導的腸道菌群失衡，提高己酸等SCFAs生成，并可能通過改善腸屏障功能和系統代謝狀態間接影響肝臟脂質代謝。另一方面，XKCP靶向肝臟SCAP/SREBP-2信號通路，緩解高脂飲食觸發的膽固醇負反饋抑制，恢復膽固醇動態平衡。同時，XKCP還可減輕肝臟氧化應激和炎癥反應，從而協同發揮降脂和護肝作用。

圖12：夏枯草膏（XKCP）恢復腸道菌群穩態并改善肝臟代謝紊亂，從而緩解高脂血癥。

【貢獻】★★★★★

本研究首次系統闡明了XKCP治療HLP的療效、物質基礎和作用機制。其降脂作用與改善腸道菌群失衡、調節FFA和SCFAs水平、調控肝臟SCAP/SREBP-2膽固醇代謝通路，以及減輕氧化應激和炎癥反應密切相關。RA和Chry被鑒定為XKCP潛在活性成分。本研究為XKCP未來用于高脂血癥臨床治療提供了實驗依據和理論支持。

同時，研究也指出仍存在若干局限。XKCP通過SCAP/SREBP-2通路調控膽固醇穩態的關鍵作用仍需進一步研究；XKCP干預、微生物組/代謝物變化、SCAP/SREBP-2通路激活與血脂改善之間的因果順序，還需要通過動態監測進一步明確；此外，XKCP與腸道菌群及其代謝物之間的關系仍需更深入探索。最后，本研究主要基于動物和細胞模型，其臨床療效仍需通過隨機對照試驗進一步驗證。

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